安益譜 TQ9100 三重四極桿液質(zhì)質(zhì)譜儀構(gòu)建全血中 6 種精神類(lèi)藥物的測(cè)定方法
一、檢測(cè)核心原理：三重四極桿的靶向定量?jī)?yōu)勢(shì)
安益譜 TQ9100 三重四極桿液質(zhì)質(zhì)譜儀依托 “一級(jí)篩選 - 二級(jí)碎裂 - 特征離子監(jiān)測(cè)” 的三重靶向機(jī)制，攻克全血中精神類(lèi)藥物檢測(cè)的基質(zhì)干擾難題：
- 靶向篩選機(jī)制：一級(jí)四極桿（Q1）精準(zhǔn)篩選 6 種目標(biāo)藥物的母離子（如氯丙嗪 m/z 319.1、奧氮平 m/z 313.1、氟西汀 m/z 310.2 等），直接排除全血中血紅蛋白、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)降解產(chǎn)物等大量非目標(biāo)離子，初步降低干擾。
- 特異性碎裂與監(jiān)測(cè)：碰撞池（Q2）在特定碰撞能量（10-30eV）下，將母離子碎裂為特征子離子（如氯丙嗪特征子離子 m/z 86.1、233.0；奧氮平特征子離子 m/z 256.1、191.0）；三級(jí)四極桿（Q3）僅捕捉特征子離子，實(shí)現(xiàn) “母離子 - 子離子” 的雙重特異性識(shí)別，徹底消除基質(zhì)背景干擾，確保定量準(zhǔn)確性。
電離模式適配：針對(duì)精神類(lèi)藥物多含氨基、哌嗪環(huán)等堿性基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，采用電噴霧電離源（ESI+），提升離子化效率，使目標(biāo)藥物響應(yīng)值較 EI 源提升 5-10 倍。
二、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)：從樣品前處理到儀器參數(shù)的全流程優(yōu)化
（一）儀器與試劑配置
類(lèi)別 | 核心組件 / 試劑 | 關(guān)鍵參數(shù)與作用 |
核心儀器 | 安益譜 TQ9100 三重四極桿質(zhì)譜儀（配 UHPLC 系統(tǒng)） | 掃描速度≥10000 Da/s，MRM 模式下檢出限≤0.1ng/mL，支持多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）與全掃描（Full Scan）切換 |
色譜柱 | Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1mm×100mm，1.7μm） | 反相色譜固定相，利用藥物疏水性差異實(shí)現(xiàn)快速分離，耐受高有機(jī)相比例 |
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | 6 種精神類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)品（氯丙嗪、奧氮平、氟西汀、舍曲林、利培酮、喹硫平，100μg/mL）及內(nèi)標(biāo)（如氯丙嗪 - d6、奧氮平 - d8，10μg/mL） | 配制梯度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，內(nèi)標(biāo)法定量，消除基質(zhì)效應(yīng)與進(jìn)樣誤差 |
前處理試劑 | 乙腈（色譜純，含 0.1% 甲酸）、乙酸銨（分析純）、固相萃取小柱（Oasis MCX，30mg/1mL） | 乙腈用于蛋白沉淀，MCX 小柱吸附堿性藥物，去除酸性雜質(zhì) |
（二）優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)條件
- 樣品前處理（針對(duì)全血基質(zhì)特點(diǎn)）：
- 蛋白沉淀：取 100μL 全血樣品，加入 20μL 內(nèi)標(biāo)溶液（1μg/mL）、300μL 乙腈（含 0.1% 甲酸），渦旋混勻 2min，12000rpm 離心 10min，取上清液；
- 固相萃取凈化：MCX 小柱依次用 3mL 甲醇、3mL 水活化，上清液上樣后，用 3mL 0.1% 甲酸水溶液淋洗，3mL 5% 氨水 - 甲醇溶液洗脫；
- 濃縮復(fù)溶：洗脫液 40℃氮吹至近干，用 100μL 流動(dòng)相（水 - 乙腈 = 70:30，含 5mmol/L 乙酸銨）復(fù)溶，渦旋混勻后過(guò) 0.22μm 有機(jī)相濾膜，待測(cè)。
- 色譜條件（高效分離與快速分析）：
- 流動(dòng)相：A 相（5mmol/L 乙酸銨水溶液，含 0.1% 甲酸）、B 相（乙腈），梯度洗脫（0-2min：90% A；2-8min：90% A→10% A；8-10min：10% A；10-10.1min：10% A→90% A；10.1-15min：90% A）；
- 柱溫：40℃；流速：0.3mL/min；進(jìn)樣量：5μL；分析時(shí)間：15min，實(shí)現(xiàn) 6 種藥物基線分離。
- 質(zhì)譜條件（MRM 模式靶向定量）：
- 電離源：ESI+，噴霧電壓 3.5kV，離子源溫度 150℃，脫溶劑氣溫度 350℃，脫溶劑氣流速 800L/h；
- MRM 參數(shù)：針對(duì)每種藥物優(yōu)化母離子、子離子及碰撞能量（如氟西汀：母離子 m/z 310.2，定量子離子 m/z 44.2，碰撞能量 25eV；定性子離子 m/z 148.1，碰撞能量 18eV），內(nèi)標(biāo)采用相應(yīng)穩(wěn)定同位素標(biāo)記物，確保定量準(zhǔn)確性。
三、方法性能驗(yàn)證：五項(xiàng)關(guān)鍵指標(biāo)滿足生物檢測(cè)要求
- 基質(zhì)效應(yīng)可控：通過(guò) “蛋白沉淀 + MCX 固相萃取” 雙重凈化，6 種藥物的基質(zhì)效應(yīng)因子（ME）為 85%-112%，RSD＜5%，無(wú)明顯基質(zhì)增強(qiáng)或抑制效應(yīng)，符合生物樣品分析規(guī)范。
- 線性范圍寬且相關(guān)性好：各藥物在 0.5-100ng/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù) R2 均＞0.999，覆蓋臨床全血中精神類(lèi)藥物的治療濃度范圍（如氟西汀治療濃度 20-80ng/mL，利培酮治療濃度 0.5-2ng/mL）。
- 精密度與準(zhǔn)確度優(yōu)異：
- 精密度：低（1ng/mL）、中（20ng/mL）、高（80ng/mL）3 個(gè)濃度水平的批內(nèi) RSD＜4%，批間 RSD＜6%；
- 準(zhǔn)確度：各濃度水平加標(biāo)回收率在 92%-108% 之間（如奧氮平低濃度回收率 95.3%，RSD 3.2%），滿足痕量生物分析要求。
- 檢出限與定量限低：MRM 模式下，6 種藥物的檢出限（LOD）為 0.05-0.1ng/mL，定量限（LOQ）為 0.15-0.3ng/mL，可檢測(cè)全血中低于治療濃度的微量藥物殘留，適用于中毒診斷與藥物監(jiān)測(cè)。
- 穩(wěn)定性良好：樣品在室溫（25℃）放置 4h、4℃冷藏 24h、-20℃冷凍 30d 及 3 次凍融循環(huán)后，藥物濃度變化率均＜8%，確保實(shí)際樣品檢測(cè)的穩(wěn)定性。
四、應(yīng)用場(chǎng)景與價(jià)值：助力臨床與司法檢測(cè)
- 臨床治療藥物監(jiān)測(cè)（TDM）：可精準(zhǔn)測(cè)定精神疾病患者全血中藥物濃度，如監(jiān)測(cè)利培酮濃度避免因濃度過(guò)高導(dǎo)致錐體外系反應(yīng)，或氟西汀濃度過(guò)低影響療效，為臨床用藥劑量調(diào)整提供數(shù)據(jù)支撐。
- 藥物中毒診斷：對(duì)疑似精神類(lèi)藥物過(guò)量中毒患者，15min 內(nèi)可快速檢出全血中藥物種類(lèi)及濃度，如氯丙嗪過(guò)量（濃度＞100ng/mL）時(shí)，輔助醫(yī)生判斷中毒程度并制定救治方案。
- 司法毒物分析：在涉毒案件或交通事故鑒定中，可檢測(cè)全血中微量精神類(lèi)藥物（如喹硫平、舍曲林），即使藥物濃度低于 LOQ，也可通過(guò) Full Scan 模式進(jìn)行定性篩查，為司法判定提供科學(xué)依據(jù)。
