三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀-基于安益譜 TQ 9100 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)的血漿中變腎上腺素類(lèi)物質(zhì)與 3 - 甲氧酪胺同時(shí)檢測(cè)方法
一、方法原理
血漿中變腎上腺素（E）、去甲變腎上腺素（NE）及 3 - 甲氧酪胺（3-MT）為兒茶酚胺類(lèi)微量代謝物（濃度多為 pg/mL 級(jí)），且血漿基質(zhì)含大量蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及內(nèi)源性干擾物。本方法利用蛋白沉淀 - 固相萃取（SPE） 聯(lián)用技術(shù)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物富集與凈化，結(jié)合安益譜 TQ 9100 的高效電噴霧離子源（ESI）與三重四極桿多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式：通過(guò) ESI 正離子模式將目標(biāo)物電離為質(zhì)子化分子離子 [M+H]?，三重四極桿精準(zhǔn)篩選特征母離子與子離子，有效排除基質(zhì)干擾；采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)（如 E-d?、NE-d?、3-MT-d?）校正前處理?yè)p失與基質(zhì)效應(yīng)，最終實(shí)現(xiàn)三種物質(zhì)的同時(shí)定性與定量。TQ 9100 的全自主研發(fā)硬件（如高靈敏度離子源、快速掃描四極桿）可確保 pg/mL 級(jí)檢測(cè)限，滿足臨床及科研對(duì)血漿中痕量?jī)翰璺影反x物的檢測(cè)需求。
安益譜TQ9100三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀
二、儀器與試劑
（一）主要儀器
- 高速冷凍離心機(jī)；
- 固相萃取裝置；
- 氮吹儀；
- 分析天平；
- 渦旋振蕩器；
- 具塞離心管；
- 固相萃取柱；
- 0.22μm 水系微孔濾膜；
- 移液器。
（二）主要試劑
三、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）樣品前處理
（二）儀器條件設(shè)置
（三）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制（適配血漿痕量檢測(cè)）
（四）樣品測(cè)定
按儀器條件測(cè)定待測(cè)血漿樣品溶液，根據(jù)保留時(shí)間與 MRM 離子對(duì)豐度比定性；通過(guò)基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血漿中 E、NE、3-MT 的濃度（單位：pg/mL）。
四、方法驗(yàn)證（符合生物樣品分析規(guī)范）
（一）線性關(guān)系
E、NE、3-MT 在 0.5-500pg/mL 濃度范圍內(nèi)線性良好，加權(quán)回歸相關(guān)系數(shù)（R2）均≥0.999，滿足血漿中痕量物質(zhì)定量要求（TQ 9100 的低噪聲信號(hào)確保低濃度點(diǎn)線性擬合準(zhǔn)確）。
（二）檢測(cè)限（LOD）與定量限（LOQ）
（三）精密度與準(zhǔn)確度
- 精密度：取低（2pg/mL）、中（50pg/mL）、高（200pg/mL）3 個(gè)濃度基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液，平行測(cè)定 6 次（日內(nèi)精密度），連續(xù)測(cè)定 3 天（日間精密度）。
- 準(zhǔn)確度：取空白血漿進(jìn)行低（2pg/mL）、中（50pg/mL）、高（200pg/mL）3 個(gè)濃度水平加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平平行測(cè)定 3 次。
（四）穩(wěn)定性
- 血漿樣品穩(wěn)定性：空白血漿加標(biāo)樣品（50pg/mL）在 4℃放置 6h、-80℃冷凍 30 天、反復(fù)凍融 3 次后，測(cè)定濃度 RSD 均≤9.0%，表明樣品穩(wěn)定性良好。
- 待測(cè)液穩(wěn)定性：前處理后的待測(cè)液在 10℃進(jìn)樣器中放置 24h，濃度 RSD≤6.5%，滿足批量樣品檢測(cè)需求。
五、注意事項(xiàng)
- 血漿處理特殊性：血漿采集后需立即加入抗凝劑（如 EDTA-K2），4℃離心 15min 分離血漿，-80℃冷凍保存，避免室溫放置導(dǎo)致目標(biāo)物降解；解凍時(shí)需緩慢融化，避免反復(fù)凍融。
- SPE 柱操作控制：MCX 柱活化后需保持柱床濕潤(rùn)，上樣與洗脫流速需嚴(yán)格控制在 0.5-1mL/min，避免流速過(guò)快導(dǎo)致目標(biāo)物吸附不充分或洗脫不完全（TQ 9100 的高靈敏度可檢出微量損失，但需盡量?jī)?yōu)化）。
- TQ 9100 維護(hù)適配：每日開(kāi)機(jī)后用利血平標(biāo)準(zhǔn)品（1ng/mL）校準(zhǔn)質(zhì)譜靈敏度與質(zhì)量軸（TQ 9100 支持自主校準(zhǔn)程序，10min 內(nèi)完成）；每檢測(cè) 50 個(gè)血漿樣品后，更換進(jìn)樣口隔墊并沖洗色譜柱（用 10% 甲醇水沖洗 30min），防止基質(zhì)殘留污染。
- 試劑與內(nèi)標(biāo)控制：甲酸、氨水需選擇低雜質(zhì)級(jí)別（如 LC-MS 級(jí)），避免引入背景干擾；內(nèi)標(biāo)工作液需單獨(dú)配制，避免與標(biāo)準(zhǔn)品交叉污染，定期核查內(nèi)標(biāo)純度（通過(guò) TQ 9100 的 MRM 模式確認(rèn)無(wú)干擾峰）。
- 生物安全防護(hù)：血漿樣品需按生物安全二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)處理，實(shí)驗(yàn)后離心管、進(jìn)樣瓶等需高壓滅菌后丟棄；接觸血漿的移液器吸頭需專(zhuān)用，避免交叉污染。
