單四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀-使用SQ910LC-MS同時(shí)測(cè)定7種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的方法
一、方法原理
7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物（涵蓋 14-16 元環(huán)結(jié)構(gòu)）具中等極性與弱堿性，痕量殘留需高特異性檢測(cè)。本方法基于萃取凈化 - 單四極桿液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)：
- 分離富集：食品基質(zhì)采用乙腈提取 - 除脂凈化，水樣通過(guò)固相萃取柱富集，去除蛋白質(zhì)、脂類等干擾物；
- 檢測(cè)定量：反相色譜柱分離后，經(jīng) SQ910 的電噴霧離子源電離，以選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式靶向捕獲準(zhǔn)分子離子峰，結(jié)合外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法定量；
核心優(yōu)勢(shì)：SQ910 的高穩(wěn)定性離子源與優(yōu)化的 SIM 算法，可實(shí)現(xiàn) 0.1μg/kg 級(jí)檢出，兼顧檢測(cè)效率與成本，適配常規(guī)實(shí)驗(yàn)室需求。
二、儀器與試劑
（一）核心儀器
- 輔助設(shè)備：高速冷凍離心機(jī)（15000r/min）、全自動(dòng)固相萃取裝置、氮吹濃縮儀、0.22μm 有機(jī)相濾膜、棕色樣品瓶。
（二）關(guān)鍵試劑
- 色譜純?cè)噭杭状肌⒁译?、甲酸（質(zhì)譜級(jí)）、正己烷；
- 標(biāo)準(zhǔn)品：7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物（紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素、麥迪霉素、乙酰螺旋霉素、地紅霉素，純度≥99%）；
- 內(nèi)標(biāo)物：紅霉素 - d7（純度≥98%，可選）；
- 其他：HLB 固相萃取柱（200mg/6mL）、無(wú)水硫酸鈉（550℃灼燒 4h）、磷酸二氫鉀（調(diào)節(jié) pH）。
三、實(shí)驗(yàn)步驟（分基質(zhì)示例）
1. 樣品前處理
（1）豬肉樣品（食品基質(zhì)）
- 稱取 2.0g 勻漿樣品，加 10mL 乙腈，渦旋 2min，超聲提取 15min；
- 加入 5g 無(wú)水硫酸鈉，渦旋脫水，12000r/min 離心 5min，取上清；
- 上清加 5mL 正己烷渦旋除脂，棄上層，下層 40℃氮吹至近干，用甲醇定容至 1mL，過(guò)膜待檢。
（2）地表水樣品（環(huán)境基質(zhì)）
- 取 500mL 水樣，加甲酸調(diào) pH 至 3~4，過(guò) 0.45μm 濾膜；
- SPE 柱依次用 5mL 甲醇、5mL 超純水活化，水樣以 3mL/min 流速上樣；
- 5mL 5% 甲醇水溶液淋洗，負(fù)壓抽干，用 8mL 甲醇分 2 次洗脫；
- 洗脫液氮吹濃縮至 1mL，加入內(nèi)標(biāo)，過(guò)膜待檢。
2. 儀器條件設(shè)置
- 液相色譜：
- 色譜柱：C18 反相柱（250mm×4.6mm×5μm）；
- 流動(dòng)相：A 相（0.1% 甲酸水溶液）、B 相（甲醇）；
- 梯度程序：初始 40% B，8min 升至 85% B，保持 4min，流速 1.0mL/min；
- 柱溫 35℃，進(jìn)樣量 20μL。
- 質(zhì)譜：
- 電離模式
- SIM 監(jiān)測(cè)離子
- 溶劑延遲
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線與測(cè)定
- 配制 0.5~200ng/mL 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，R2 需≥0.998；
- 樣品與空白（基質(zhì)經(jīng)相同前處理）交替測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算含量，內(nèi)標(biāo)法校正基質(zhì)效應(yīng)。
四、方法驗(yàn)證數(shù)據(jù)
- 線性關(guān)系：7 種藥物在 0.5~200ng/mL 范圍內(nèi)線性良好，R2 均＞0.998；
- 檢出限與定量限：食品基質(zhì) LOD 0.1~0.3μg/kg，LOQ 0.3~1.0μg/kg；水樣 LOD 0.05~0.1ng/L，LOQ 0.15~0.3ng/L；
- 精密度：同一濃度樣品平行測(cè)定 6 次，RSD≤8%；
- 準(zhǔn)確度：加標(biāo)濃度 0.5~50μg/kg（食品）、1~20ng/L（水樣）時(shí)，回收率 80%~110%。
五、實(shí)際應(yīng)用場(chǎng)景
- 食品監(jiān)管：畜禽肉、水產(chǎn)品中大環(huán)內(nèi)酯類獸藥殘留篩查，符合 GB 31650-2019 要求；
- 環(huán)境監(jiān)測(cè)：地表水、污水中藥物殘留檢測(cè)，支撐污染溯源；
- 藥品質(zhì)控：抗生素制劑中有效成分含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查。
六、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
- 樣品穩(wěn)定性：采集后立即 - 20℃冷凍，避免大環(huán)內(nèi)酯類水解，48h 內(nèi)完成前處理；
- SPE 柱活化：確保柱床全程濕潤(rùn)，干燥會(huì)導(dǎo)致吸附效率下降 30% 以上；
- 儀器維護(hù)：每周清洗離子源，每 200 針校正質(zhì)量軸，避免離子抑制；
- 基質(zhì)校正：復(fù)雜基質(zhì)（如高脂肪樣品）需采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線消除干擾。
