三重四極桿液質聯(lián)用儀-安益譜TQ9100三重四極桿液質聯(lián)用儀測定人血漿中變腎上腺素類物質和3-甲氧酪胺含量
安益譜TQ9100三重四極桿液質聯(lián)用儀測定人血漿中變腎上腺素類物質和3-甲氧酪胺含量的方法如下：
方法原理
- 凈化富集：采用弱陽離子交換（WCX）固相萃取技術，特異性吸附堿性目標物，去除血漿中蛋白質、脂質等干擾基質。
- 分離檢測：經(jīng)反相色譜柱分離后，通過TQ9100的電噴霧離子源電離，以多反應監(jiān)測（MRM）模式靶向捕獲特征離子對，排除基質噪音干擾。
- 定量校正：采用同位素內標法校正基質效應與前處理損失，確保定量準確性。
儀器與試劑
- 輔助設備：96孔WCX固相萃取板、正壓固相萃取裝置、氮吹濃縮儀、高速冷凍離心機、移液器、EDTA抗凝棕色采血管。
- 關鍵試劑：色譜純乙腈、甲醇、甲酸；甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素、3-甲氧酪胺標準品；3-甲氧酪胺-d4、甲氧基腎上腺素-d3內標物；WCX固相萃取柱；超純水；空白血漿。
實驗步驟
- 樣品采集與保存：用EDTA抗凝管采集靜脈血4mL，1小時內離心（4℃，3000r/min，10min）分離血漿，血漿樣品于-80℃冷凍保存。
- 樣品前處理：
- 取500μL血漿樣品于EP管，加入20μL內標溶液（2000pmol/L），渦旋混勻30s（2500rpm）。
- 固相萃取活化：WCX萃取板依次用200μL甲醇、200μL超純水活化，待液體自然流干。
- 上樣與淋洗：加入樣品液，正壓（0.2MPa）推動上樣，隨后用500μL超純水、500μL乙腈依次淋洗，抽干3min。
- 洗脫與復溶：用100μL乙腈（含2%甲酸）洗脫，收集洗脫液；40℃氮吹至近干，用100μL復溶液（50%乙腈+0.1%甲酸水溶液）復溶，過0.22μm濾膜待檢。
- 儀器條件設置：
- 液相色譜條件
- 質譜條件
方法驗證數(shù)據(jù)
- 線性關系：各目標化合物的校正曲線均顯示出良好的線性關系，相關系數(shù)（R2）均大于0.99。
- 檢出限與定量限：未明確給出具體數(shù)值，但TQ9100對典型目標物的檢出限可達極低水平。
- 精密度：對同一濃度水平的標準溶液進行多次重復進樣分析，保留時間和峰面積的相對標準偏差（RSD）均較小。
- 準確度：各目標化合物的回收率在91.7%-106.3%之間。
實際應用場景
- 臨床診斷：用于嗜鉻細胞瘤等兒茶酚胺分泌腫瘤的篩查與診斷。
- 藥物研發(fā)：監(jiān)測藥物干預后體內兒茶酚胺代謝水平變化，評估藥效與安全性。
- 流行病學研究：大規(guī)模人群血漿樣本篩查，分析代謝物水平與心血管疾病的關聯(lián)。
