Anyeep TQ9100 針對 GB23200.121-2021 植物源性食品中 331 種農(nóng)藥及其代謝物殘留量測定的完整解決方案
2021 年 3 月 3 日，國家衛(wèi)生健康委員會、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、國家市場監(jiān)督管理總局聯(lián)合發(fā)布 GB23200.121-2021《植物源性食品中 331 種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用法》，并于 2021 年 9 月 3 日正式實施。該標準是國內(nèi)首個單針測定農(nóng)藥殘留品種最多的 LC-MS/MS 國標，其引入 QuECHERS 前處理方法，大大簡化實驗流程，一種前處理方法可同時用于 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 檢測，且適用于水果、蔬菜、糧食、油料、茶葉、堅果和香辛料、食用菌等多種植物源性食品，全面覆蓋各類相關(guān)農(nóng)產(chǎn)品。本方案基于安益譜公司 Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，參考 GB23200.121-2021 標準要求，建立針對植物源性食品中農(nóng)藥殘留檢測的完整方案。
安益譜TQ9100三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀
儀器設(shè)備及試劑
儀器設(shè)備
- Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)：融合超高效液相色譜高效分離能力與串聯(lián)質(zhì)譜高靈敏度、高選擇性檢測能力。質(zhì)譜部分采用電噴霧離子化源（ESI）或大氣壓化學離子化源（APCI），以 ESI 源為例，高電場作用下溶液樣品形成帶電液滴，溶劑揮發(fā)后產(chǎn)生氣態(tài)離子，離子經(jīng)三重四極桿質(zhì)量分析器，依據(jù)質(zhì)荷比（m/z）不同實現(xiàn)分離檢測。該系統(tǒng)具備高靈敏度，如 90° 直角噴霧設(shè)計提高離子化效率、降低背景噪音，檢測某些低濃度有機磷農(nóng)藥時檢測限可達 pg/mL 級別；串聯(lián)金屬四極桿設(shè)計無限接近理論電場，有效分離質(zhì)量數(shù)相近離子；配合超高效液相色譜快速分離與質(zhì)譜高速掃描，可在短時間內(nèi)完成復雜樣品分析，如 30min 內(nèi)完成植物源性食品多種農(nóng)藥檢測一針進樣分析；ANYEEP Chemstation 軟件具有中文操作界面，集成儀器控制、調(diào)諧校準、數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)處理等功能，操作簡便。
- 16 位液體自動進樣器：實現(xiàn)自動進樣，提高進樣準確性與重復性，減少人為誤差。
- Waters ACQUITY UPLC BEH C18 色譜柱（2.1×100 mm，1.7μm）：具有良好分離性能與化學穩(wěn)定性，用于分離復雜樣品中的農(nóng)藥及其代謝物。
- 旋渦振蕩器：用于樣品與試劑快速混合，加速反應(yīng)進程，如在樣品前處理時促使農(nóng)藥從樣品基質(zhì)中快速溶出至提取溶劑。
- 超聲萃取機：利用超聲波空化作用，進一步強化樣品中農(nóng)藥向提取溶劑的轉(zhuǎn)移，提高萃取效率。
- 離心機：通過離心力實現(xiàn)溶液分層，分離提取液與樣品殘渣，如在樣品前處理后分離乙腈相和水相。
試劑材料
- 甲醇、乙腈（質(zhì)譜純，美國 Thermo Fisher 公司）：用于樣品提取以及作為液相色譜流動相的有機相組成部分。
- 甲酸（質(zhì)譜純，德國 CNW 公司）：添加到流動相中，調(diào)節(jié)流動相酸堿度，改善農(nóng)藥離子化效果，提高檢測靈敏度與色譜峰對稱性。
- 甲酸銨（色譜純，德國 Merck 公司）：加入流動相調(diào)節(jié)離子強度，有助于農(nóng)藥的離子化和分離。
- 氯化鈉、無水硫酸鎂、檸檬酸鈉二水合物、檸檬酸二鈉鹽倍半水合物、乙酸鈉（農(nóng)殘純，分別購自上海阿拉丁、上海安譜、上海麥克林等）：用于樣品前處理中的鹽析、緩沖過程，促進乙腈相與水相分離。
- 陶瓷均質(zhì)子（上海安譜，60105 - 370 - B）：在樣品前處理振蕩過程中，輔助樣品與提取溶劑充分混合。
- PSA（上海安譜，SBEQ - CA2401 - 10g）：用于吸附樣品提取液中的脂肪酸、色素等雜質(zhì)，凈化樣品。
- GCB（40 - 120 μm，上海安譜，GEEQ - 072012）：針對顏色較深樣品，可有效吸附色素等干擾物質(zhì)，進一步提高樣品凈化效果。
- 微孔濾膜（0.2μm，上海安譜，50120965 ）：過濾樣品溶液，去除微小顆粒雜質(zhì)，保護儀器進樣系統(tǒng)與色譜柱。
- 236 種農(nóng)藥標準溶液混標（濃度 50 μg/mL，購于壇墨）：作為標準物質(zhì)，用于繪制標準曲線與方法驗證。
樣品前處理
蔬菜、水果、食用菌和糖料
- 稱取 10g 試樣（精確至 0.01g）于 50mL 塑料離心管中，加入 10mL 乙腈及 1 顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩 1min，使樣品與乙腈充分混合，促使農(nóng)藥從樣品基質(zhì)溶出至乙腈中。
- 加入 4g 無水硫酸鎂、1g 氯化鈉、1g 檸檬酸鈉、0.5g 檸檬酸氫二鈉，劇烈震蕩 1min，利用鹽析作用促使乙腈相和水相分離，隨后在 4200r/min 條件下離心 5min。
- 吸取 1mL 上清液至內(nèi)含 150mg 無水硫酸鎂、25mg PSA 的 2mL 塑料離心管中，無水硫酸鎂進一步除去水分，PSA 吸附脂肪酸、色素等雜質(zhì)。對于顏色較深的試樣，離心管中另加入 2.5mg GCB，渦旋混勻 1min，再次在 4200r/min 條件下離心 5min。
- 吸取上清液過微孔濾膜，所得濾液即為待測定溶液。
干制蔬菜、水果和食用菌
- 稱取 1g 試樣（精確至 0.01g）于 50mL 塑料離心管中，加 9mL 水渦旋混勻，使干制品充分復水，靜置 30min。
- 后續(xù)步驟同新鮮的蔬菜、水果、食用菌和糖料處理方式一致。
儀器分析條件
液相條件
- 流動相：A 相為 0.01% 甲酸 - 水（含 2mM 甲酸銨 ）；B 相為 0.01% 甲酸 - 乙腈（含 2mM 甲酸銨）。甲酸和甲酸銨改善農(nóng)藥離子化效果，調(diào)節(jié)酸堿度保證色譜峰對稱。
- 色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1×100 mm，1.7μm）。
- 流速：0.3mL/min，兼顧分離效果與分析速度。
- 柱溫：40℃，優(yōu)化柱溫提高分離效率與重現(xiàn)性。
- 進樣量：5μL，保證進樣準確性與重復性。
- 梯度洗脫程序：初始時，流動相 A 比例為 95%，保持 1min；隨后在 10min 內(nèi)線性變化至流動相 A 比例為 5%，并保持 5min；然后在 2min 內(nèi)恢復至初始比例，平衡 5min。通過該梯度洗脫程序?qū)崿F(xiàn)對多種農(nóng)藥的有效分離。
質(zhì)譜條件
- 離子化源：電噴霧離子化源（ESI±），可根據(jù)農(nóng)藥性質(zhì)選擇正離子或負離子模式，同時采集正負離子信號，擴大檢測范圍。
- 溫度：550℃，保證樣品充分離子化，避免化合物分解。
- 噴霧電壓：5000V，氣簾氣 35psi，霧化器 60psi，輔助加熱氣 60psi，碰撞氣 12，優(yōu)化這些參數(shù)提高離子化與離子傳輸效率。
- 掃描模式：動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測（DMRM）分段掃描，依據(jù)農(nóng)藥保留時間與特征離子對，將掃描過程分為多個時間段，針對性監(jiān)測目標離子，提高檢測選擇性與靈敏度。
標準曲線繪制與定量方法
- 儲備液配制：精確吸取相應(yīng)標準品溶液，用乙腈稀釋配置成 10μg/mL 的混合儲備液。
- 標準曲線溶液配制：以 QuEChERS 凈化后的對應(yīng)的植物源性食品空白基質(zhì)作為溶劑，將混合儲備液稀釋成系列工作標準溶液，濃度分別為 2、5、10、20、50、100、200 和 500ng/mL。
- 定量方法：以外標法進行定量，以各農(nóng)藥濃度為橫坐標，對應(yīng)的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。通過樣品中目標農(nóng)藥峰面積，在標準曲線上查得對應(yīng)濃度，進而計算樣品中農(nóng)藥殘留量。
方法驗證
- 線性關(guān)系：選取青椒、梨、大米、食用油、茶葉等常見植物源性空白樣品，按前處理方法得到空白基質(zhì)溶液，將混合標準溶液逐級用其稀釋成 8 個校準級別的基質(zhì)標準品。結(jié)果表明，在基質(zhì)標曲條件下，所有待測農(nóng)殘組分線性相關(guān)系數(shù) R2 均大于 0.99，線性關(guān)系良好。
- 靈敏度與定量限：方法中 236 種農(nóng)殘定量限均達到 GB23200.121-2021 中規(guī)定的對應(yīng)基質(zhì)定量限要求，在定量限條件下，所有測定農(nóng)殘化合物均能獲得良好譜圖效果，可實現(xiàn)準確定量定性分析。
- 精密度與回收率：分別在不同樣品基質(zhì)定量限添加水平下進行加標回收率測試。結(jié)果顯示，多種樣品基質(zhì)中 236 種農(nóng)殘回收率均在 60 - 120% 之間，精密度 CV 不超過 15%，表明方法準確性與穩(wěn)定性良好。
結(jié)果分析與報告
- 數(shù)據(jù)采集與處理：利用 Anyeep TQ9100 配套的 TQMS Data Acquisition Software 軟件進行數(shù)據(jù)采集，TQMS Data Processing Software 軟件進行數(shù)據(jù)處理。通過導入軟件內(nèi)置的國標限值要求表，輸入樣品基質(zhì)類型，軟件可對樣品中不同種類農(nóng)藥殘留值進行超限判讀和統(tǒng)計，實現(xiàn)快速篩查。
- 報告生成：最終生成包含樣品信息、檢測農(nóng)藥種類、殘留量、是否超標等內(nèi)容的檢測報告，為植物源性食品農(nóng)藥殘留檢測提供準確、規(guī)范的結(jié)果呈現(xiàn)。
綜上所述，本方案利用 Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，結(jié)合 GB23200.121-2021 標準的前處理及儀器分析方法，能夠高效、準確地實現(xiàn)植物源性食品中多種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定，滿足食品安全檢測需求。
