基于安益譜 TQ8100 三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀的短鏈脂肪酸測定方法
一、方法原理
短鏈脂肪酸（SCFAs，通常指 C2-C6 脂肪酸，如乙酸、丙酸、丁酸等）極性強(qiáng)、揮發(fā)性差異大，直接進(jìn)樣易出現(xiàn)峰形拖尾與吸附損失。本方法采用硫酸 - 甲醇酯化衍生法，將羧基轉(zhuǎn)化為極性更低的甲酯衍生物，通過安益譜 TQ8100 的氣相色譜實(shí)現(xiàn)高效分離，再經(jīng)電子轟擊電離源（EI）電離，以三重四極桿特有的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式捕獲特征離子對，結(jié)合內(nèi)標(biāo)法定量。該原理可有效排除生物基質(zhì)（如糞便、血清）或食品基質(zhì)中的干擾組分，定性準(zhǔn)確率與定量精密度優(yōu)于傳統(tǒng)單四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀。
安益譜TQ8100三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀
二、儀器與試劑
（一）主要儀器
- 高速冷凍離心機(jī)；
- 渦旋振蕩器；
- 恒溫水浴鍋；
- 分析天平；
- 具塞離心管；
- 容量瓶；
- 0.22μm 有機(jī)系微孔濾膜。
（二）主要試劑
- 甲醇（色譜純）、乙醚（色譜純）、正己烷（色譜純）；
- 濃硫酸（分析純，質(zhì)量分?jǐn)?shù) 98%）；
- 無水硫酸鈉（分析純，550℃灼燒 4h，密封保存）；
- 短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品（乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸，純度均≥99%）；
- 內(nèi)標(biāo)物（乙酸 - d4、丁酸 - d7，純度≥98%，用于校正衍生效率與基質(zhì)效應(yīng)）；
- 飽和氯化鈉溶液（分析純試劑配制，煮沸冷卻后使用）；
- 氫氧化鈉（分析純），用于調(diào)節(jié)樣品 pH。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）樣品前處理（以糞便樣品為例，其他基質(zhì)可適配調(diào)整）
（二）儀器條件設(shè)置
（三）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
（四）樣品測定
四、方法驗(yàn)證
（一）線性關(guān)系
（二）檢測限與定量限
（三）精密度
（四）準(zhǔn)確度
五、注意事項(xiàng)
- 衍生化控制：濃硫酸需緩慢滴加并混勻，避免局部過熱導(dǎo)致樣品碳化；衍生溫度與時(shí)間需嚴(yán)格控制，確保反應(yīng)完全（可通過加標(biāo)回收驗(yàn)證衍生效率）。
- 儀器維護(hù)：安益譜 TQ8100 的進(jìn)樣口隔墊每 50 針更換 1 次，色譜柱每使用 100 針后需在 220℃老化 30min，每月用全氟三丁胺（PFTBA）校準(zhǔn)質(zhì)量軸，保證檢測靈敏度。
- 基質(zhì)干擾排除：食品或生物樣品中高含量蛋白質(zhì)、脂肪會影響萃取效率，可增加蛋白沉淀步驟（如加入乙腈）或采用固相萃取柱（如 HLB 柱）凈化。
- 試劑與樣品保存：衍生試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，標(biāo)準(zhǔn)品避免反復(fù)凍融；樣品采集后需立即冷凍（-80℃），分析前解凍并快速處理，防止 SCFAs 降解。
- 安全防護(hù)：實(shí)驗(yàn)中涉及濃硫酸與有機(jī)溶劑，需在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，佩戴耐酸手套與護(hù)目鏡，避免皮膚直接接觸。
