三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀-使用ANYEEP TQ9100 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)測定人血漿中15種膽汁酸含量
一、實(shí)驗(yàn)原理
利用乙腈沉淀血漿蛋白提取 15 種膽汁酸（含游離型與結(jié)合型），經(jīng) C18 色譜柱分離后，通過 ANYEEP TQ9100 的電噴霧負(fù)離子源（ESI?）電離，以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式定量分析。該儀器的 180° 碰撞反應(yīng)池可有效去除基質(zhì)干擾，確保檢測特異性。
安益譜TQ9100三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀
二、儀器與試劑
- 儀器
- Agilent Poroshell 120 EC C18 色譜柱
- 高速冷凍離心機(jī)、氮吹儀、微孔板震蕩儀
- 試劑
- 15 種膽汁酸標(biāo)準(zhǔn)品：CA、GCA、TCA、DCA、GDCA、TDCA、CDCA、GCDCA、TCDCA、UDCA、GUDCA、TUDCA、LCA、GLCA、TLCA（純度≥98%）
- 內(nèi)標(biāo)：CA-d4（氘代膽酸，純度≥99%）
- 乙腈、甲醇（色譜純），甲酸（質(zhì)譜純），超純水（18.2MΩ?cm）
三、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）樣品前處理
- 取 100μL 血漿樣本至離心管，加入 20μL 內(nèi)標(biāo)溶液（1μg/mL）
- 加入 380μL 乙腈，渦旋 30s，4℃、15000rpm 離心 5min
- 取 400μL 上清至 96 孔板，40℃氮吹至干
- 加 100μL 復(fù)溶液（50% 乙腈），1200rpm 震蕩 5min，4000rpm 離心 5min，取 5μL 進(jìn)樣
（二）色譜條件
表 1 梯度洗脫程序
時(shí)間 (min) | A 相 (%) | B 相 (%) |
0 | 60 | 40 |
2 | 50 | 50 |
3.5 | 15 | 85 |
4 | 10 | 90 |
4.1 | 2 | 98 |
4.5 | 2 | 98 |
4.6 | 60 | 40 |
6 | 60 | 40 |
（三）質(zhì)譜條件
- 離子源
- 氣體參數(shù)
- 掃描模式
四、方法驗(yàn)證
- 線性范圍：各膽汁酸在 0.01-10μmol/L 范圍內(nèi)線性良好（r2≥0.995），權(quán)重 1/x2 校正
- 精密度：低 / 高濃度樣品 RSD＜10%（n=6）
- 準(zhǔn)確度：加標(biāo)回收率 92.2%-106.9%
- 檢出限：0.003-0.01μmol/L（S/N=3）
五、結(jié)果與討論
- 該方法 6 分鐘完成單樣本分析，適配臨床高通量檢測需求（如 ICP 篩查）
- ANYEEP TQ9100 的抗污染離子源設(shè)計(jì)降低了血漿基質(zhì)干擾，結(jié)合內(nèi)標(biāo)法提高定量準(zhǔn)確性
- 檢測結(jié)果可輔助診斷肝炎、膽汁淤積等肝膽疾病，高危值（＞100μmol/L）需緊急干預(yù)
