單四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀-使用安益譜SQ910LC-MS同時(shí)測(cè)定7種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的方法
一、方法原理
針對(duì)紅霉素、羅紅霉素、阿奇霉素等 7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物（含內(nèi)酯環(huán)與氨基糖結(jié)構(gòu)，具弱堿性），采用乙腈提取 - 正己烷除脂的前處理技術(shù)富集目標(biāo)物，通過 C18 色譜柱梯度洗脫分離，利用安益譜 SQ910LC-MS 的電噴霧離子源在正離子模式下電離，形成 [M+H]?質(zhì)子化分子離子。在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式下檢測(cè)特征母離子與子離子，結(jié)合外標(biāo)法定量。
安益譜SQ910單四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀
二、儀器與試劑
（一）核心儀器
- 超高效液相色譜系統(tǒng)；
- 高速冷凍離心機(jī)、氮吹濃縮儀；
- 分析天平、渦旋振蕩器、固相萃取裝置。
（二）試劑與材料
- 標(biāo)準(zhǔn)品：紅霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、泰樂菌素、替米考星、螺旋霉素；
- 溶劑：乙腈、甲醇（均為色譜純），甲酸（質(zhì)譜純），正己烷（分析純）；
- 輔助試劑：無水硫酸鈉、0.22μm 有機(jī)相濾膜；
- 色譜柱：Waters Acquity BEH C18 柱；
- 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)：空白豬肉 / 蜂蜜基質(zhì)（經(jīng)檢測(cè)不含目標(biāo)物）。
三、樣品前處理（適配食品基質(zhì)）
以豬肉樣品為例，其他基質(zhì)可酌情調(diào)整提取溶劑比例：
- 樣品制備：稱取 5.0g 勻漿樣品于 50mL 離心管，加入 20μL 標(biāo)準(zhǔn)工作液（1μg/mL），渦旋混勻 1min；
- 提取凈化：加入 15mL 乙腈，超聲提取 20min，加入 3g 無水硫酸鈉，渦旋 30s，10000r/min 離心 5min，取上清液 10mL 至另一離心管；
- 除脂濃縮：加入 5mL 正己烷，渦旋 2min，靜置分層后棄上層正己烷，重復(fù)除脂 2 次，收集下層溶液 40℃氮吹濃縮至近干；
- 復(fù)溶過濾：用 1mL 甲醇 - 水（1:1，v/v）復(fù)溶殘?jiān)瑴u旋 1min，過 0.22μm 有機(jī)濾膜，轉(zhuǎn)移至樣品瓶待測(cè)。
四、定量與方法驗(yàn)證
- 標(biāo)準(zhǔn)曲線：以空白基質(zhì)提取液配制 0.1~100ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)系列，按前處理步驟操作，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，線性回歸系數(shù) R2≥0.999；
- 方法性能：
- 精密度：低、中、高濃度（0.5、10、80ng/mL）樣品 6 次平行測(cè)定；
- 準(zhǔn)確度：豬肉基質(zhì)中加標(biāo)回收率 75%~105%，蜂蜜基質(zhì)中回收率 70%~108%；
- 檢出限（LOD），定量限（LOQ）：優(yōu)于同類檢測(cè)方法；
五 、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
- 前處理控制：
- 乙腈提取時(shí)需充分超聲，確保大環(huán)內(nèi)酯類藥物從蛋白質(zhì)結(jié)合態(tài)釋放，提取效率提升至 90% 以上；
- 正己烷除脂需重復(fù) 2 次，避免脂質(zhì)干擾效率，降低信噪比。
- 儀器操作與維護(hù)：
- 每日開機(jī)后用 1pg 利血平校驗(yàn)儀器靈敏度，確保 MRM 模式下信噪比＞10000:1；
- 色譜柱使用后用甲醇 - 水（90:10）沖洗 30min，去除柱內(nèi)殘留的強(qiáng)保留物質(zhì)，延長(zhǎng)柱效壽命；
- ESI 源每周清潔 1 次，去除噴針與錐孔殘留的鹽類沉積物，避免離子傳輸效率下降。
- 樣品穩(wěn)定性：
- 提取后的樣品需在 4℃避光保存，24h 內(nèi)完成分析，避免大環(huán)內(nèi)酯類藥物降解；
- 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇配制，-20℃冷凍保存，有效期 6 個(gè)月，使用前室溫平衡。
