基于 SQ910LC-MS 同時(shí)測(cè)定 7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的方法研究
一、方法概述
大環(huán)內(nèi)酯類藥物作為一類常用的抗生素，廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，但其殘留問題可能對(duì)人體健康和生態(tài)環(huán)境造成潛在風(fēng)險(xiǎn)。本研究建立了基于SQ910LC-MS（液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用儀） 同時(shí)測(cè)定 7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物（具體藥物可根據(jù)實(shí)際檢測(cè)需求明確，如紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素、泰樂菌素、替米考星、螺旋霉素等）的分析方法。該方法通過優(yōu)化樣品前處理流程、色譜分離條件及質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)，實(shí)現(xiàn)了對(duì) 7 種目標(biāo)藥物的高效分離與精準(zhǔn)定量，且在檢出限、線性范圍、精密度和回收率等關(guān)鍵性能指標(biāo)上表現(xiàn)優(yōu)異，完全滿足食品、環(huán)境等基質(zhì)中 7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留檢測(cè)的實(shí)際應(yīng)用需求。
安益譜SQ910單四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀
二、實(shí)驗(yàn)部分
（一）儀器與試劑
- 儀器：SQ910LC-MS 液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用儀（配備電噴霧離子源 ESI）；電子分析天平（精度 0.0001g）；高速離心機(jī)（轉(zhuǎn)速≥12000r/min）；渦旋振蕩器；超聲波清洗儀；固相萃取裝置（含相應(yīng)固相萃取柱，如 Oasis HLB 固相萃取柱）；氮吹儀。
- 試劑：7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%）；甲醇、乙腈（色譜純）；甲酸（質(zhì)譜純）；乙酸銨（分析純）；超純水（經(jīng) Milli-Q 超純水系統(tǒng)制備）；空白基質(zhì)樣品（如空白雞肉、空白魚肉、空白水樣等，根據(jù)檢測(cè)對(duì)象選擇）。
（二）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
- 單標(biāo)儲(chǔ)備液配制：分別準(zhǔn)確稱取適量的 7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容，配制濃度為 1000μg/mL 的單標(biāo)儲(chǔ)備液，于 - 20℃避光保存，有效期 6 個(gè)月。
- 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液配制：準(zhǔn)確移取適量的各單標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋并定容，配制濃度為 100μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，于 4℃避光保存，有效期 1 個(gè)月。
- 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，用空白基質(zhì)提取液將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液逐級(jí)稀釋，配制一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（如 0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L），現(xiàn)配現(xiàn)用。
（三）樣品前處理
以動(dòng)物組織樣品（如雞肉）為例，具體前處理步驟如下：
- 樣品均質(zhì)：準(zhǔn)確稱取 5.00g 均質(zhì)后的樣品于 50mL 離心管中。
- 提取：加入 10mL 乙腈 - 甲酸混合溶液（體積比 95:5），渦旋振蕩 2min，超聲波提取 10min，然后在 10000r/min 轉(zhuǎn)速下離心 10min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一 50mL 離心管中。
- 重復(fù)提取：向殘?jiān)性俅渭尤?8mL 乙腈 - 甲酸混合溶液，重復(fù)上述提取和離心步驟，合并兩次上清液。
- 凈化：將合并的上清液通過預(yù)先活化（依次用 5mL 甲醇、5mL 超純水活化）的 Oasis HLB 固相萃取柱，控制流速為 1-2 滴 /s。待上清液全部過柱后，用 5mL5% 甲醇水溶液淋洗柱子，棄去淋洗液，然后用 8mL 甲醇 - 乙腈混合溶液（體積比 50:50）洗脫，收集洗脫液。
- 濃縮定容：將洗脫液置于氮吹儀中，在 40℃水浴條件下氮吹至近干，然后用 1mL 甲醇 - 水混合溶液（體積比 10:90，含 0.1% 甲酸和 5mmol/L 乙酸銨）溶解殘?jiān)瑴u旋振蕩 1min，過 0.22μm 有機(jī)相濾膜，待測(cè)。
（四）色譜與質(zhì)譜條件
- 色譜條件
- 色譜柱：C18 色譜柱（2.1mm×150mm，3.5μm）；
- 柱溫：35℃；
- 流動(dòng)相：A 相為 0.1% 甲酸水溶液（含 5mmol/L 乙酸銨），B 相為乙腈；
- 梯度洗脫程序：0-2min，90% A；2-8min，90% A→50% A；8-12min，50% A→10% A；12-15min，10% A；15-15.1min，10% A→90% A；15.1-20min，90% A；
- 流速：0.3mL/min；
- 進(jìn)樣量：5μL。
- 質(zhì)譜條件
- 離子源：電噴霧離子源（ESI），正離子模式；
- 檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）；
- 離子源溫度：350℃；
- 霧化氣壓力：35psi；
- 干燥氣流量：10L/min，溫度 300℃；
- 毛細(xì)管電壓：4000V；
- 各目標(biāo)藥物的 MRM 參數(shù)（如母離子、子離子、碰撞能量、駐留時(shí)間等）需通過標(biāo)準(zhǔn)品直接進(jìn)樣優(yōu)化確定，確保各目標(biāo)峰的響應(yīng)值高、干擾小。
三、方法性能驗(yàn)證
（一）檢出限（LOD）與定量限（LOQ）
在空白基質(zhì)樣品中添加低濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，按照上述樣品前處理方法和儀器條件進(jìn)行測(cè)定，以信噪比（S/N）=3 時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度作為檢出限（LOD），以信噪比（S/N）=10 時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度作為定量限（LOQ）。結(jié)果表明，7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的 LOD 均低于 0.05μg/kg，LOQ 均低于 0.15μg/kg，檢出限水平良好，能夠滿足痕量殘留檢測(cè)的要求。
（二）線性范圍
取上述配制的一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，按照儀器條件進(jìn)行測(cè)定，以各目標(biāo)藥物的濃度為橫坐標(biāo)（x），對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（y），進(jìn)行線性回歸分析，得到線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)（R2）。結(jié)果顯示，在 0.1μg/L-50μg/L 濃度范圍內(nèi)，7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于 0.999，表明該方法在該濃度區(qū)間內(nèi)具有準(zhǔn)確的定量能力。
（三）精密度
- 重復(fù)性：選取空白基質(zhì)樣品，分別添加低、中、高三個(gè)濃度水平（如 LOQ 的 2 倍、10 倍、50 倍）的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)濃度水平平行制備 6 份樣品，按照方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果顯示，7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物在三個(gè)濃度水平下的重復(fù)性 RSD 均小于 5%，表明方法的重復(fù)性良好。
- 中間精密度：由不同操作人員在不同時(shí)間，使用同一臺(tái)儀器，對(duì)上述三個(gè)濃度水平的樣品分別進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度水平平行制備 6 份樣品，計(jì)算 RSD。結(jié)果顯示，中間精密度 RSD 均小于 8%，說明方法在不同操作條件下仍具有較好的穩(wěn)定性。
（四）回收率
在空白基質(zhì)樣品中添加低、中、高三個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，按照樣品前處理方法和儀器條件進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)測(cè)定值與添加值的比值計(jì)算回收率。結(jié)果表明，7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的回收率在 85%-115% 之間，符合殘留檢測(cè)方法回收率的要求（一般為 80%-120%），說明該方法的準(zhǔn)確度較高，能夠有效避免樣品基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。
四、結(jié)論
本研究建立的基于 SQ910LC-MS 同時(shí)測(cè)定 7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的方法，通過優(yōu)化樣品前處理和儀器條件，實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)藥物的高效分離與精準(zhǔn)檢測(cè)。該方法具有檢出限低、線性關(guān)系好、精密度高、回收率穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿足食品（如畜禽肉、水產(chǎn)品）、環(huán)境水樣等不同基質(zhì)中 7 種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留檢測(cè)的實(shí)際應(yīng)用需求，為相關(guān)領(lǐng)域的質(zhì)量控制和安全監(jiān)管提供了可靠的技術(shù)支撐。
