三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀-安益譜TQ8100三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀關(guān)于短鏈脂肪酸的測定
一、方法原理
短鏈脂肪酸（SCFAs，C2-C6）因極性強(qiáng)、揮發(fā)性差異大，直接進(jìn)樣易發(fā)生峰形拖尾與吸附損失。本方法采用硫酸 - 甲醇酯化衍生法，將羧基轉(zhuǎn)化為極性更低的甲酯衍生物，再通過安益譜 TQ8100 實(shí)現(xiàn)檢測：
- 分離階段：氣相色譜柱高效分離衍生物，解決極性差異導(dǎo)致的分離難題；
檢測階段：電子轟擊電離源（EI）電離后，以三重四極桿特有的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式捕獲特征離子對，結(jié)合內(nèi)標(biāo)法（乙酸 - d4、丁酸 - d7）定量，排除基質(zhì)干擾。
核心優(yōu)勢：定性準(zhǔn)確率與定量精密度優(yōu)于傳統(tǒng)單四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀，適用于復(fù)雜基質(zhì)分析。
二、儀器與試劑
（一）核心儀器
- 安益譜 TQ8100 三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（高靈敏度、高精度定性定量能力）；
- 輔助設(shè)備：高速冷凍離心機(jī)、渦旋振蕩器、恒溫水浴鍋、分析天平、0.22μm 有機(jī)系微孔濾膜等。
（二）關(guān)鍵試劑
- 色譜純試劑：甲醇、乙醚、正己烷；
- 衍生試劑：98% 濃硫酸（分析純）；
- 標(biāo)準(zhǔn)品：乙酸、丙酸、丁酸等 C2-C6 脂肪酸（純度≥99%）；
- 內(nèi)標(biāo)物：乙酸 - d4、丁酸 - d7（純度≥98%）；
- 其他：無水硫酸鈉（550℃灼燒 4h）、飽和氯化鈉溶液、氫氧化鈉（調(diào)節(jié) pH）。
三、實(shí)驗(yàn)步驟（以糞便樣品為例）
1. 樣品前處理
- 稱取 0.2g 糞便樣品于離心管，加入內(nèi)標(biāo)液與超純水，渦旋混勻；
- 加氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 至 12，超聲提取 10min，12000r/min 離心 5min，取上清；
- 上清加濃硫酸酸化至 pH≤2，加入乙醚 - 正己烷混合液（1:1）萃取 2 次，合并有機(jī)相；
- 有機(jī)相中加無水硫酸鈉脫水，加入甲醇 - 濃硫酸（95:5）衍生劑，70℃水浴 30min；
- 冷卻后加飽和氯化鈉溶液終止反應(yīng)，取上層有機(jī)相過 0.22μm 濾膜，待檢測。
2. 儀器條件設(shè)置
- 氣相色譜：
- 質(zhì)譜：
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品測定
- 配制 0.1-100ng/mL 系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加入內(nèi)標(biāo)后按上述步驟衍生，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
- 樣品按相同方法處理后上機(jī)測定，通過內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。
四、方法驗(yàn)證數(shù)據(jù)
- 線性關(guān)系：C2-C6 脂肪酸在 0.1-100ng/mL 范圍內(nèi)線性良好，R2 均＞0.999；
- 檢出限與定量限：檢出限達(dá)低納克級，定量限滿足痕量分析需求；
- 精密度：同一濃度標(biāo)準(zhǔn)品多次測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜5%；
- 準(zhǔn)確度：加標(biāo)回收率 90%-110%，符合檢測規(guī)范要求。
五、實(shí)際應(yīng)用場景
- 生物醫(yī)學(xué)：腸道內(nèi)容物、糞便、血清中 SCFAs 檢測，助力腸道菌群與代謝疾病研究；
- 食品科學(xué)：發(fā)酵食品（酸奶、泡菜）中 SCFAs 定量，評估發(fā)酵工藝；
- 環(huán)境分析：水體、土壤中 SCFAs 監(jiān)測，解析微生物降解過程。
六、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
- 衍生化控制：濃硫酸需緩慢滴加混勻，70℃水浴 30min 確保反應(yīng)完全，可通過加標(biāo)回收驗(yàn)證效率；
- 儀器維護(hù)：進(jìn)樣口隔墊每 50 針更換，色譜柱每 100 針 220℃老化 30min，每月用 PFTBA 校準(zhǔn)質(zhì)量軸；
- 基質(zhì)處理：高蛋白 / 脂肪樣品需加乙腈沉淀蛋白或 HLB 柱凈化；
- 樣品保存：采集后立即 - 80℃冷凍，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致 SCFAs 降解。
