三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀-使用ANYEEP TQ9100 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)測(cè)定變腎上腺素類物質(zhì)和3-甲氧酪氨含量
一、方法原理
變腎上腺素類物質(zhì)（甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素）與 3 - 甲氧酪氨均為兒茶酚胺代謝產(chǎn)物，在血漿等生物樣品中含量極低（pmol/L 級(jí)）且基質(zhì)復(fù)雜。本方法基于固相萃取 - 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)檢測(cè)：
- 凈化富集：采用弱陽(yáng)離子交換（WCX）固相萃取技術(shù)，特異性吸附堿性目標(biāo)物，去除血漿中蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等干擾基質(zhì)；
- 分離檢測(cè)：反相色譜柱分離后，經(jīng) ANYEEP TQ9100 的電噴霧離子源（ESI+）電離，以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式靶向捕獲特征離子對(duì)，排除基質(zhì)噪音干擾；
- 定量校正：采用同位素內(nèi)標(biāo)法（如 3 - 甲氧酪氨 - d4）校正基質(zhì)效應(yīng)與前處理?yè)p失，確保定量準(zhǔn)確性。
核心優(yōu)勢(shì)：TQ9100 的高靈敏度檢測(cè)器與 10?動(dòng)態(tài)范圍，可實(shí)現(xiàn) 10 pmol/L 級(jí)痕量檢測(cè)，適配臨床診斷對(duì)低濃度指標(biāo)的監(jiān)測(cè)需求。
二、儀器與試劑
（一）核心儀器
- 輔助設(shè)備：96 孔 WCX 固相萃取板、正壓固相萃取裝置、氮吹濃縮儀、高速冷凍離心機(jī)、移液器、EDTA 抗凝棕色采血管。
（二）關(guān)鍵試劑
- 色譜純?cè)噭阂译妗⒓状?、甲酸（質(zhì)譜級(jí)，純度≥99.9%）；
- 標(biāo)準(zhǔn)品：甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素、3 - 甲氧酪氨（純度≥98%）；
- 內(nèi)標(biāo)物：3 - 甲氧酪氨 - d4、甲氧基腎上腺素 - d3（純度≥98%）；
- 其他：WCX 固相萃取柱（25mg / 孔）、超純水（電阻率≥18.2MΩ?cm）、空白血漿（無(wú)目標(biāo)物殘留）。
三、實(shí)驗(yàn)步驟（以血漿樣品為例）
1. 樣品采集與保存
- 用 EDTA 抗凝管采集靜脈血 4mL，立即置于冰浴中，1 小時(shí)內(nèi)離心（4℃，3000r/min，10min）分離血漿；
- 血漿樣品于 - 80℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融（≤3 次）。
2. 樣品前處理（固相萃取法）
- 取 500μL 血漿樣品于 EP 管，加入 20μL 內(nèi)標(biāo)溶液（濃度 2000 pmol/L），渦旋混勻 30s（2500rpm）；
- 固相萃取活化：WCX 萃取板依次用 200μL 甲醇、200μL 超純水活化，待液體自然流干；
- 上樣與淋洗：加入樣品液，正壓（0.2MPa）推動(dòng)上樣，隨后用 500μL 超純水、500μL 乙腈依次淋洗，抽干 3min；
- 洗脫與復(fù)溶：用 100μL 乙腈（含 2% 甲酸）洗脫，收集洗脫液；40℃氮吹至近干，用 100μL 復(fù)溶液（50% 乙腈 + 0.1% 甲酸水溶液）復(fù)溶，過(guò) 0.22μm 濾膜待檢。
3. 儀器條件設(shè)置
- 液相色譜：
- 質(zhì)譜：
四、方法驗(yàn)證數(shù)據(jù)（契合臨床檢測(cè)要求）
- 線性關(guān)系
- 檢出限與定量限
- 精密度
- 準(zhǔn)確度
五、實(shí)際應(yīng)用場(chǎng)景
- 臨床診斷：血漿中變腎上腺素類物質(zhì)與 3 - 甲氧酪氨檢測(cè)，用于嗜鉻細(xì)胞瘤等兒茶酚胺分泌腫瘤的篩查與診斷；
- 藥物研發(fā)：監(jiān)測(cè)藥物干預(yù)后體內(nèi)兒茶酚胺代謝水平變化，評(píng)估藥效與安全性；
- 流行病學(xué)研究：大規(guī)模人群血漿樣本篩查，分析代謝物水平與心血管疾病的關(guān)聯(lián)。
