三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀-使用ANYEEP TQ9100 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)測定人血清中睪酮
一、方法設(shè)計(jì)：儀器特性與臨床需求的適配邏輯
- 目標(biāo)物與檢測痛點(diǎn)
睪酮（C??H??O?，m/z 288.2）作為關(guān)鍵性激素，血清中濃度差異極大（成年男性 14～25.4nmol/L，女性 1.3～2.8nmol/L），且受蛋白質(zhì)、甾體激素同源物（如雄烯二酮）干擾嚴(yán)重。TQ9100 憑借串聯(lián)金屬四極桿 + 180° 碰撞反應(yīng)池設(shè)計(jì)，可突破基質(zhì)干擾與痕量檢測瓶頸，契合臨床對(duì)高雄激素血癥的精準(zhǔn)診斷需求。
安益譜TQ9100三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀
二、實(shí)驗(yàn)流程：從血清處理到檢測的全步驟
（一）樣品前處理（液液萃取法）
- 提取凈化：取 200μL 血清于 1.5mL EP 管，加入 20μL 內(nèi)標(biāo)液（睪酮 - d3，終濃度 2nmol/L），渦旋 30s；加入 980μL 甲基叔丁基醚，2500rpm 渦旋 10min，4℃、14000rpm 離心 10min。
- 濃縮復(fù)溶：取 800μL 上清液至 96 孔板，45℃氮吹至干；加入 160μL 50% 甲醇復(fù)溶液，2000rpm 震搖 2min，4000rpm 離心 5min，取 5μL 進(jìn)樣。
三、方法驗(yàn)證：臨床檢測的可靠性保障
- 線性與檢出限
睪酮在 0.1～50nmol/L 范圍內(nèi)線性良好（R2≥0.998），方法檢出限（LOD，S/N=3）0.03nmol/L，定量限（LOQ，S/N=10）0.1nmol/L，遠(yuǎn)低于女性血清最低參考值（1.3nmol/L）。
- 精密度與準(zhǔn)確度
低、中、高 3 個(gè)濃度（0.5、15、40nmol/L）加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)中，回收率 92.6%～105.3%，日內(nèi)精密度 RSD≤3.2%，日間精密度 RSD≤4.8%（n=6），符合 CLIA'88 臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)。
- 基質(zhì)效應(yīng)控制
采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線校正，結(jié)合 TQ9100 碰撞反應(yīng)池的干擾去除能力，基質(zhì)效應(yīng)誤差控制在 ±8% 以內(nèi)，避免蛋白質(zhì)降解產(chǎn)物導(dǎo)致的檢測偏差。
四、臨床實(shí)戰(zhàn)要點(diǎn)：精準(zhǔn)檢測的優(yōu)化策略
- 樣品穩(wěn)定性控制
血清樣品采集后需立即離心分離（3000rpm，10min），2～8℃可保存 48h，-20℃冷凍可保存 3 個(gè)月，避免室溫放置導(dǎo)致睪酮降解（24h 降解率＞15%）。
- 儀器維護(hù)技巧
每檢測 50 個(gè)樣本后，用 50% 甲醇沖洗色譜柱 10min；離子源每兩周拆解清潔，通過 ANYEEP Chemstation 一鍵調(diào)諧功能（以全氟三丁胺為校準(zhǔn)物）確保質(zhì)量軸穩(wěn)定性（24h 誤差≤0.02u）。
- 干擾排除方案
針對(duì)雄烯二酮（m/z 287.2）等同源干擾物，通過設(shè)置特異性 MRM 通道（睪酮定量離子 97.0 vs 雄烯二酮定量離子 97.0 的碰撞能量差異 10eV）實(shí)現(xiàn)基線分離。
- 臨床數(shù)據(jù)處理
啟用軟件內(nèi)置的 “臨床參考范圍標(biāo)注” 功能，自動(dòng)匹配不同性別 / 年齡段參考值（如男性 14～25.4nmol/L），生成帶預(yù)警標(biāo)識(shí)的檢測報(bào)告，輔助 PCOS 等疾病診斷。
